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检验男人不育的实验室方法

日期:2018-7-23(原创文章,禁止转载)

重庆哪家医院看白癜风好抗精子抗体就是精子的一个毒物。他让精子的质量变差,导致精子不能和卵子结合,孕育出生命。

抗精子抗体与精子结合后,在补体参与下,可导致精子制动和死亡,利用台盼蓝或伊红Y 等染料使死精子染色,间接验证血清或分泌液中是否有制动精子的抗体存在沈阳癫痫病

(一) 台盼蓝染色法

【准备】

(1) 待检血清的分离和灭活补体。

(2) AB血型人血清(补体)制备。

(3) 2%台盼蓝液配制(用蒸馏水)。

(4) 台盼蓝-生理盐水溶液配制:取适量生理盐水,加等体积2%台盼蓝水溶液,混匀即可。

(5) 配制0.01 mol/L,pH 7.4 PBS溶液。

【方法】

(1) 取正常新鲜精液[精子浓度为(40~ 100)106/mL]用pH7.4 PBS作1∶10稀释,以500r/min 30min离心洗涤一次,弃去上清,沉渣用PBS调整精子浓度为100106/mL 的精子悬液。

(2) 在小试管内加入1滴待检血清,1滴精子悬液和 2滴补体血清。置37℃ 孵育,并于30min成都癫痫医院、60min分别追加2滴补体血清,直至90min后加入 1滴台盼蓝生理盐水溶液,继续孵育 60min,取出小试管,以500r/min,30min离成都哪家医院治疗癫痫心,弃去上清,将沉渣涂片,待干燥后镜下观察。以阴性血清作对照组,以同样条件和方法处理

(3) 计数:对照组:记录数至100个无染色精子(活精子)时所需的总精子数(含100个无染色精子加一定数量染色的死精子)。实验组:记录对照组相应的总精子数,把其中所含的无染色精子(活精子)数作X。将100-X所得的数目,即为被检血致死的精子数,这个数目称为精子毒性指数(STI)。

【判断】

STI25时,P0.01,判为阳性。STI在 15~ 20之间,判为可疑。STI15时,判为阴性。本法所得阳性率与精子制动试验的阳性率较为一致。

(二) 伊红Y染色法

【准备】

(1) 用蒸馏水配制4% 伊红 Y 染液。

(2) 配制0.01mol/L,pH7.4 PBS溶液。

【方法】

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(1) 取正常新鲜精液(精子浓度宜大于:60106/mL),佛山癫痫医院在哪用pH 7.4的 PBS洗涤 3次,调整精子浓度为10107/mL。

(2) 取延安治癫痫病最好的医院精子悬液16L,移置载玻板的漆孔内,分别设2个测定和对照孔,另取待检血清20L,补体血清4L 加入测定孔内,对照孔只加待测血清不加补体,充分混匀。

(3) 把玻板移入湿盒内,在37℃孵育30min,每孔加4%伊红Y 4L,加上盖玻片使其作用 2min,进行镜检。

【判断】

由于活精子不着色,死精子着染为红色,计算200个精子中,死精子所占的百分数,减去对照组死精子的百分数,即为抗体杀灭精子的百分率。以杀灭精子10% 以上者为阳性。

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